P16/Ki-67蛋白双染检测，宫颈癌无创筛查最后一道防线
宫颈鳞癌p16/ki-67染色，肿瘤细胞 胞核、胞质阳性，DAB显色
■ 产品编号：MAB-0673
■ 鼠抗人：单克隆抗体
■ 克隆号：MX007
■ 适用组织：石蜡切片
■ 阳性部位：胞核/胞质
■ 预处理：EDTA热修复
p16蛋白又称P16INK4A、MST1和CDKN2，是一种重要的抑癌基因。特异性地和CDK4或CyclinCDK4复合物结合，抑制CDK4的活性，从而抑制细胞由G1进入S期，对Rb基因控制的细胞增殖周期中起负调节作用。用于各种恶性肿瘤如肺小细胞癌、恶黑、乳腺癌的研究。目前研究表明在高级别宫颈上皮内肿瘤和高危型HPV感染的肿瘤中高表达。在宫颈腺上皮内肿瘤和宫颈腺癌中也有表达。故该抗体对宫颈癌的检测有极大意义。
Ki-67与PCNA一样，主要用于判断细胞的增殖活性，表达在所有活动的细胞周期（G1、S、G2和有丝分裂期）中，而在G0期不表达。临床资料表明Ki－67增殖指数高低与许多肿瘤的分化程度、浸润转移以及预后密切相关。因此也是某些恶性肿瘤的预后的重要参考指标之一。SP6与MIB-1均为优良克隆。
研究发现，全球绝大部分宫颈癌病例都是由人乳头瘤病毒（HPV）所引起，只有长期持续感染高危型HPV病毒才会导致高级别宫颈上皮内瘤变（CIN），进而发展为宫颈癌。
宫颈癌防治的关键在于筛查出高风险人群，找出高级别CIN 患者，及时干预。采用免疫细胞化学双染技术在宫颈上皮细胞或组织中检测两种生物标志物p16和Ki-67以辅助诊断宫颈癌前病变已成为当前各国研究的重点。
面对宫颈癌筛查现状，应如何提高细胞学检测敏感性的同时，能够不损失其特异性或者可以通过客观的生物标志物，标记出高级别病变的细胞，以辅助细胞学检测结果的判读和诊断？
P16/Ki-67双染检测宫颈癌无创筛查最后一道防线
2012年，美国病理学家协会（CAP）和美国阴道镜和宫颈病理学会（ASCCP）联合发布了下生殖道HPV相关的鳞状病变的命名标准化计划（LAST）指南，最终认定p16是唯一有足够的临床研究数据证实其可用于宫颈癌前病变诊断的生物标志物。对于正常细胞的HPV一过性感染，免疫组化检测不能检测到p16表达，而HPV转化性感染则会引起p16的过度表达，并被免疫组化检测到。因此，p16可作为HPV感染的间接标志物，广泛应用于宫颈癌前病变诊断。
p16在细胞周期的阻滞期具有抑制细胞增殖的功能，而另一种生物标志物Ki-67则指示细胞增殖。在同一个细胞周期中，如二者同时表达则提示细胞周期失调。CINtec PLUS（P16/Ki67双染检测）细胞学双染检测能够同时检测出HPV持续感染后过表达的p16和Ki-67。如双染阳性，强烈提示CIN2+病变，需立即进行阴道镜检查；如双染阴性，可随访一年后复查，显著降低阴道镜转诊率，减少患者不必要的检查与治疗。
2015 年Besthesda 指南推荐免疫细胞化学可辅助细胞学诊断。指南指出，在检出高度鳞状上皮内病变（HSIL）中，p16 和Ki-67双染与细胞学检测的特异性相当，且具有高敏感性。余俐教授表示，CINtec PLUS 检测（P16/Ki67双染检测）能更准确地发现潜在高级别病变患者，提高宫颈癌前病变检出率，弥补现有宫颈癌细胞学检测的不足，降低漏诊率，减少过度诊断。
研究证实 双染检测灵敏度与特异性
美国食品与药物管理局（FDA）注册的美国本土最大型的前瞻性宫颈癌筛查临床试验ATHENA 研究，对47208例受试者进行了基于cobas HPV初筛策略和以细胞学为基础筛查策略的3年随访试验。结果显示，针对HPV16和18型以外的12种高危型HPV阳性患者，CINtec PLUS检测（P16/Ki67双染检测）能够得到简单、客观的结果，明确提示患者风险以及是否需转诊阴道镜。
CINtec PLUS（P16/Ki67双染检测）阳性患者，在3年内进展为CIN3+病变的风险远高于细胞学ASC-US以上的患者，具有更好的阳性预测值，需要转诊阴道镜以减少漏诊。
CINtec PLUS（P16/Ki67双染检测）阴性患者，3年内发生CIN3+病变的风险低于细胞学未见上皮内病变或恶性病变（NILM）的患者，具有更好的阴性预测值，不需要转诊阴道镜，帮助减少过度治疗。
前瞻性PALMS研究入组来自5个欧洲国家的27349例病例。大量临床数据显示，CINtec PLUS双染检测（P16/Ki67双染检测）具有高灵敏度与高特异性（以CIN2+为终点），可用于ASC-US分流、低度鳞状上皮内病变（LSIL）分流、HPV初筛后对高危型HPV阳性者分流、对细胞学阴性但高危型HPV阳性患者进行分流。
该研究2015年发表在《癌症细胞病理学》（CancerCytopathol）杂志。最新数据显示，对于细胞学ASC-US 患者的分流中，CINtec PLUS 检测（P16/Ki67双染检测）和HC2HPV检测的阴道镜转诊率分别为26%与42%；对于细胞学LSIL患者的分流中，阴道镜转诊率分别为53%与84%。证实使用CINtecPLUS检测（P16/Ki67双染检测）显著降低阴道镜转诊率，减少不必要的阴道镜转诊，避免过度诊断，同时可帮助临床医生对患者进行精准分层管理，进而实现患者早期干预。
