核酸提取液
【产品名称】
通用名称:核酸提取纯化试剂
英文名称:StrongStep® DNA/RNA Extraction Kit
【包装规格】
50人份/盒,100人份/盒。
【预期用途】
用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。其处理后的产物用于临床体外检测使用。
【检验原理】
经裂解液裂解后,样本中核酸(DNA/RNA)释放,在高盐条件下被磁珠吸附,经洗涤液洗涤去除杂质后,以水洗脱下磁珠上的核酸,用于下游检测。
【主要组成成分】
产品名称 |
50 人份/盒 |
100 人份/盒 |
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Magnetic Beads① |
保存于2~8℃,避免冷冻。 |
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羟基磁珠 |
0.5mL |
1mL |
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裂解液 |
10mL |
20mL |
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去蛋白洗涤液I |
15mL 加15mL异丙醇后使用 |
30mL 加30mL异丙醇后使用 |
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洗涤液II |
5mL 加20mL无水乙醇后使用 |
10mL 加40mL无水乙醇后使用 |
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无核酸酶灭菌水 |
2.5mL |
5mL |
羟基磁珠:300nm 硅羟基磁珠;
裂解液:异硫氰酸胍、十二烷基肌酸钠、柠檬酸钠、二硫苏糖醇、无核酸酶灭菌水;
去蛋白洗涤液I:异硫氰酸胍、无核酸酶灭菌水;
洗涤液II:氯化钠, Tris-HCl缓冲液、无核酸酶灭菌水;
无核酸酶灭菌水:分子级别。
本试剂盒不提供但必须具有的成分和设备:
无水乙醇(分析纯)
异丙醇(分析纯)
磁性分离器:需用户自备,可从南京黎明生物制品有限公司购买。
【储存条件及有效期】
2~8℃储存(可保存于室温)。
常温运输。
有效期:1年。
生产日期及失效日期见标签。
【使用方法】
首次使用前:
在去蛋白洗涤液 I中加入指定量(见瓶身标签)的异丙醇(分析纯),并于“□”内打上“√”,混匀后于室温下密闭保存。
在洗涤液 II中加入指定量(见瓶身标签)的无水乙醇(分析纯),并于“□”内打上“√”,混匀后于室温下密闭保存。
准备物品:
1.5 mL离心管:2个/样品(DNase/RNase-free)
单通道移液器:2 μL、20 μL、200 μL、1000 μL(DNase/RNase-free)
漩涡振荡器
恒温金属浴(或水浴锅): 55℃
磁性分离器
操作步骤:
1. 裂解与结合
取一个新的1.5 mL离心管,加入200 μL样本,200μL 裂解液,400 μL异丙醇和20 μL 硅羟基磁珠,调整合适的转速漩涡振荡混合均匀,并将离心管置于55℃加热15 min(每隔5 min颠倒数次)(提取RNA不加热)。然后将离心管置于磁性分离器上静置1 min,用移液器吸去上清液。
2. 去蛋白洗涤
加入500 μL 去蛋白洗涤液I,用移液器缓慢吹打磁珠10次或漩涡震荡10 s,使磁珠充分重悬,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管。
注:应尽量除尽洗涤液。
3. 洗涤
加入500 μL洗涤液II,用移液器缓慢吹打磁珠10次或漩涡震荡10 s,使磁珠充分重悬,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,用移液器移去上清液并取下离心管。
重复上洗涤步骤一次。
注:应尽量除尽洗涤液。
4. 干燥
保持离心管于磁性分离器上,将其置于超净工作台中风干至磁珠表面无明显光泽(2~4 min)。
5. 洗脱
加入20~50 μL无核酸酶灭菌水,用移液器缓慢吹打磁珠50次或漩涡震荡1 min,使磁珠充分重悬,于55℃加热(提取RNA室温放置)5 min后,将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清,转移上清液至新的离心管中,此即为纯化得到的病毒基因组,可保存于-20℃。
【产品性能指标】
1、 外观
试剂盒应组分齐全,包装外观清洁,无泄漏,无破损,标示/标签字迹清楚。
2、装量
每个容器装量应不少于其标签的标示值。
3、提取性能
3.1 纯度
DNA提取产物OD260/OD280 值在1.6-1.8之间;RNA提取产物OD260/OD280值在1.7-2.0之间。OD260/OD230大于2.0。
3.2 产量
加入已知量的DNA(RNA),经试剂盒提取后,根据产物OD260数值,计算回收后的产物量,与加入量进行比较,提取回收率不小于80%。
3.3 完整度
以琼脂糖电泳检测片段完整度,结果应为单一条带。
3.4 线性范围
对浓度为10IU/mL~1.0E+08IU/mL的HBV样本进行提取,经定量PCR检测结果呈线性R2大于0.9。
对浓度为10IU/mL~1.0E+08IU/mL的HCV样本进行提取,经定量PCR检测结果呈线性R2大于0.9。
3.5 精密度
重复提取样本PCR检测结果Ct值的CV值小于5%。
4、重复性
同一实验室,同一操作员,重复提取10个平行样本,分别计算产量、纯度和完整度的精密度,RSD应小于5%。
5、再现性
再现性条件下提取核酸的产量、纯度和完整度的RSD值小于5%
【注意事项】
1. 操作之前,请务必认真阅读本产品手册。
2. 避免对磁珠进行冷冻、离心等操作。
3. 磁珠用前应充分重悬均匀。
4. 磁珠干燥前,用移液器吸尽洗涤液。
5. 干燥过程中避免磁珠过度干燥,否则会严重降低核酸洗脱效率。
6. 建议使用质量较好的离心管和移液器吸头,避免因粘附磁珠而造成损失。
7. 在96孔板中进行磁性分离操作时,磁珠吸附时间可适当延长。
【基本信息】
备案人/生产企业名称:南京黎明生物制品有限公司
住所:南京市玄武区蒋王庙 116-1 号
联系方式:
1.邮政编码:210042
2.电话:025-85476723,85422069
3.传真:025-85476387
4.网址:www.limingbio.com
售后服务单位名称:南京黎明生物制品有限公司
生产地址:南京市玄武区花园路 12 号
生产备案凭证编号:
【医疗器械备案凭证编号/产品技术要求编号】
【说明书核准日期及修改日期】
发布时间:2020.07.12 版本号:1.0