淋病的实验
淋病(gonorrhea)是指由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖道的化脓性感染，如尿道炎、宫颈炎和直肠炎等。如不及时治疗，淋球菌可侵入泌尿生殖器的其他部位，引起附睾、前列腺、输卵管及盆腔等器官的炎症，甚至可经血液传播到全身其他部位，形成淋菌性关节炎、腱鞘炎、心内膜炎、脑膜炎等合并症。但另一方面，也有5%-20%的男性和60%的女性病人呈现无症状经过。淋球菌好侵犯人类泌尿生殖道的柱状上皮细胞，凭借特异的结构和粘膜表面与之相匹配的部位粘附。继而侵入细胞内增殖，使粘膜上皮破坏，形成炎症，出现一系列症状。

一、淋病诊断步骤
 人类尿道上皮尤其是柱状上皮细胞对淋球菌相当敏感。在感染淋球菌后，经过一段时间的潜伏期(平均3天~5天)。由于细菌和毒素的作用，粘膜坏死、脱落、神经末梢暴露、炎症浸润、组织液渗出，病人会出现尿急、尿痛和尿道流脓等急性尿道炎症状。
淋球菌感染男性病人，常会出现尿痛和尿道流脓等临床症状。这时取尿道分泌物作涂片，经革兰染色后，如见到有符合淋球菌形态特征的革兰阴性细胞内双球菌，则初步诊断阳性，可对病人进行治疗；如涂片查菌阴性，应从尿道取标本进行淋球菌培养。淋球菌感染的女病人，常仅有脓性宫颈分泌物或无症状。对女病人不推荐用涂片法检查，而主张直接从宫颈取材进行培养。标本经培养后，菌落形态典型、氧化酶试验阳性，菌体为革兰阴性双球菌，则初步诊断为阳性培养物，如有某些性状不符合，则可进一步用糖发酵试验及直接免疫荧光法等作鉴定加以确诊。
二、标本的采集和运送
    在取材作涂片时，应先用灭菌等渗盐水洗净尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，用棉拭或白金耳蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后作染色。如由男性病人前尿道取材作培养时，应用白金耳或藻酸钙拭子深入尿道2cm~4cm，取出的分泌物应略带粘膜。从女病人的宫颈取材时，应将棉拭插入宫颈口1.5cm，稍转动并停留10s~30s，让棉拭充分吸附分泌物。从肛门取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，从紧靠肛环边的隐窝中取材。检查淋菌性咽炎时从扁桃体或扁桃体窝或咽后壁取材。
淋球菌对外环境因素如干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养成功，应尽量缩短标本离体时间。在医院门诊部，从病人取材后，应立即接种到培养基上进行培养。如取材本处离实验室较远时，可将标本置于无营养性的Stuart或Amies运送培养基或选择性生长培养墓如Trmlsgrow中运送到实验室。标本在无营养运送培养中(在室温25℃条件下)，12h对分离率无影响，在24h内分离大于90%。如需时再应使用生长运送培养基，但即便如此，也不应超过2天。

淋病的涂片检查
【原理】
急性淋菌性尿道炎病人常有大量黄色脓性分泌物。在有些脓细胞内可有许多淋球菌。淋球菌革兰染色呈阴性反应，具有特殊的菌体形态。因此，取病人尿道分泌物制成涂片后做革兰染色，检查有无典型细胞内革兰阴性双球菌，可作初步诊断的依据。
【方法】
1．先用灭菌等渗盐水的拭子揩洗尿道口，然后用手指由后向前挤出脓液，蘸取脓液后轻轻涂布于载玻片上。待自然干燥后加热固定，染色，镜检。常用革兰染色，也可用美蓝染色。
2．涂片后，待自然干燥后火焰固定，
革兰氏染色：结晶紫染色1min。
碘媒染液染色1min。
乙醇丙酮脱色1min左右。
石炭酸复红复染1min。
晾干后油镜镜检。    
【结果】
在急性病人的尿道脓性分泌物革兰染色涂片中，常可见到大量红色多形核白细胞。在有些细胞中吞噬有淋球菌。淋球菌为革兰阴性，呈卵圆形或圆形，常成对排列，接触面扁平或稍凹。菌体长约0.7m，宽约0.5m。但两菌大小可有差异。多数多形核细胞中并不含淋菌，但不少脓细胞中常含有一至数对，甚至20对30对淋球菌，淋球菌常存在于细胞浆内。
在病期较长的淋病病人的涂片中淋球菌比较少，有时呈单个、四联和八叠状，位于细胞外。对有些菌有时难以下结论，需进行培养和鉴定。
【注意事项】
1．涂片时不要用力涂擦，而应将棉拭在玻片上轻轻滚动，因急性病人诊断标准为见到“细胞内革兰阴性双球菌”。涂擦过劲，细胞破裂或变形，菌从细胞内逸出，会造成诊断上的混淆。
2．涂片厚薄要合适。涂片过厚，加之染色过程中脱色时间不足，革兰阴性菌也会呈现紫色。因此，脱色时间要视涂片厚薄而定。在大量染片时，最好用一已知的革兰阳性菌(如葡萄球菌)和阴性菌(如大肠杆菌)作对照。
3．固定涂片，只要将涂片迅速通过火焰2~3次，避免加热过度使细胞变形扭曲。当把加热的涂片放到手背上时应不感到太烫。
4．不推荐用涂片检查来诊断淋菌性直肠和咽部的感染，也不推荐用作判愈。
【临床意义】
涂片检查方法简便、有效、价格低廉且有一定的敏感性和特异性。但其特异性随着取材部位的不同而有所不同。例如，从男性尿道取材特异性高，而从女性宫颈取材特异性低。因女性宫颈分泌物中杂菌很多，有的在形态上很像淋球菌。因此，世界卫生组织不推荐用涂片法来检查女性病人。

淋球菌的分离培养
【原理】
如果标本中有淋球菌，则在合适的培养基上经培养后可长成菌落。各种细菌在培养基上生长成的菌落形态各不相同。根据菌落的大小、表面高起或扁平、光泽、色素和边缘的情况等，作为细菌鉴定的标准。
【方法】
1．取材
培养要获得成功，取材的部位和方法要准确。由男性病人前尿道取材时，应该用细小棉拭子或藻酸钙拭子或白金耳伸入尿道口2cm~4cm，取出的分泌物应略带粘膜。从女病人的宫颈取材时，应先用温水湿润扩阴器(不要用液体石蜡等润滑油)。应将棉拭插入宫颈口1.5cm处，稍转动并停留10s~30s，让棉拭充分吸附分泌物。从直肠取材时，应将棉拭插入肛门2.5cm以上，如果棉拭碰到粪便，应换一个棉拭重取。检查淋菌性咽炎时，应从扁桃体及扁桃体窝取材。为了提高阳性率，可同时取二份标本进行培养。
2．培养基
由于淋球菌的营养要求较复杂，所用的培养基中应含有动物蛋白及细菌生长所需的各种因子。目前国内常用的是血液琼脂或巧克力琼脂。为抑制杂菌，在培养基中可加入少量抗菌物质如多粘菌素B(25g/ml)和万古霉素(3.3g/ml)等。所用血液如羊血、兔血和人血均可，浓度为8%~10%。但避免血液中加入抗凝剂等药物。培养基的pH值以7.4为好。目前国外常用的培养基有Thayer-Martin(T-M)培养基、NewYork City(NYC)培养基和Martin-Lewis(ML)培养基等。T-M培养基是在GC基础培养基中，加入血红蛋白(1%)、抗生素(万古霉素3g/ml、粘菌素7.5g/ml和制霉菌素12.5g/ml)和淋球菌增菌剂，使绝大多数杂菌被抑制而淋球菌菌落长得较大，在乎皿中几乎呈纯培养，从而大大提高了由子宫颈、尿道，尤其是咽和直肠部位分离出淋菌的阳性率。
3．培养条件
淋球菌对外环境变化颇为敏感，对寒冷和干燥抵抗力很弱。因此，为了保证培养有足够的成功率，取材后应立即接种，标本离体时间越短越好。取材处离实验室距离较远时，应将标本接种于Smart或Amies运送培养基或1%葡萄糖肉浸液中，并注意在运送过程中保温。接种的血平皿应先放在37℃温箱中预温。培养的最适温度为35℃~36℃，超过38.5℃或低于30℃便生长不良。因此，孵育的温度要恒定。淋球菌为需氧菌，但最初从人体分离时，为促进生长，需用5%二氧化碳环境培养。为保持一定的湿度，可在培养缸中放些浸水棉球。
【结果】
淋球菌在血平皿上经24h~48h的培养后，可形成圆形、凸起、湿润、光滑、半透明或灰白色菌落。边缘呈花瓣状，直径为0.5mm ~1.0mm。用白金耳触之有粘性。如继续培养，菌落面积增大，表面变得粗糙，边缘出现皱缩。若从菌落上取材作涂片，可见到菌的大小及染色的深度有差异，排列也不一致，约有25%的菌为典型的双球菌，其他75%为单球菌、四联形或八叠形。
淋球菌在液体培养基中生长于液体表面，或稍有轻度混浊和颗粒沉淀。
【注意事项】
1．培养要获得成功，取材是关键之一。取材的深度一定要够，因为淋球菌好发于柱状上皮细胞而不是复层鳞状上皮细胞。男性尿道前端包括舟状窝都为复层鳞状上皮覆盖，所以要深人到尿道内2cm~4cm处，并蘸取少量粘膜，阳性率才高。女性病人取材时，要求将棉拭插入宫颈管，转动并停留10s~30s也是这个道理。有些人只在阴道口取少量分泌物作分离培养，阳性率当然会降低，因为有生活力的菌从宫颈随分泌物由阴道流出需一定时间，阴道内pH值低，又因各种杂菌的作用，到阴道口时淋菌的生活力较低，再加上培养过程中各种因素的影响，培养成功的机会就会减少。
2．对症状不典型的男病人取材，最好是在晨起排尿前或排尿后2~3h之后。另外，采样者应熟练掌握前列腺按摩术，必要时作前列腺按摩取材。
3．对女性淋病的检查主张用淋球菌培养。国内目前使用血液琼脂加入多粘菌素作抑菌剂效果尚可。但蛋白胨最好用进口的(Oxoid公司产品或日本产或Polypepton等)，并用肉浸液加酵母浸膏等为好。
4．国内目前使用的血液琼脂或巧克力琼脂中加人多粘菌素和万古霉素以分别抑制革兰阴性和革兰阳性杂菌。但由于部分淋球菌(某些地区可高达5%)对万古霉素也敏感，因此，最好不用万古霉素。
5．淋球菌在血平板上培养24h，虽能见到菌落，但个儿很小，难以辨认其特点。24h~36h，菌落迅速长大。所以观看菌落特征最好在36h左右。超过36h，菌落特征也会有较大的改变。
【临床意义】
淋球菌培养用作诊断和某些特殊目的。培养法对男性及女性标本都是适用的，是世界卫生组织推荐的筛查淋病病人的唯一方法，也是诊断淋病的金标准方法。

初步鉴定试验
革兰染色
【原理】
 淋球菌有特定形态。挑取可疑菌落在玻片上制成盐水涂片，经革兰染色，若见到具淋菌特征形态的双球菌，可作出初步诊断。
【方法】
在载玻片上加盐水一滴，取可疑菌落制成涂片，干燥固定后作革兰染色。
【结果】
可见革兰阴性球菌。菌体为0.7m×0.5m大小，呈肾形或卵圆形。约1/4为双球菌，多数为单球菌，个别呈四联或八叠状。与分泌物涂片所见不同，此涂片中无白细胞。
【注意事项】
1． 涂片厚薄要均匀，革兰氏染色正确，必要时做阴性和阳性对照。
2． 陈旧的培养物，涂片颜色结果不典型，应取新鲜培养物。
【临床意义】
典型革兰氏阴性双球菌表明可能为淋球菌，但必须进一步做试验鉴定。

氧化酶试验
【原理】
淋球菌在生长过程中产生氧化酶。往培养基上生长了24h~48h的菌落上加氧化酶试剂(0.5%~1%新配制的盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺水溶液)，淋球菌菌落的颜色可变成紫红乃至黑色。
【方法】
1．在混有杂菌的淋球菌分离平皿上滴加氧化酶试剂后变成紫红色的菌落为氧化酶试验阳性。    
2．也可先挑取可疑菌落涂于干滤纸条上，滴加试剂，涂菌处变成红色者为阳性。
3．或先滴一滴试剂于滤纸条上(勿太湿)，再涂菌落，观察颜色变化。
【结果】
淋球菌氧化酶阳性，但氧化酶阳性者并不一定是淋球菌。
【注意事项】
1．为了保证育良好的反应，所用氧化酶试剂不应过分陈旧。正常的氧化酶试剂
(盐酸二甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺)应为谈红色。如果试剂买来时已成灰色或黑色，说明已失效而不应使用。试剂溶液配好后应放在棕色玻璃瓶中避光保存可使用一周。
2．氧化酶试剂遇铁也会出现红色而造成假阳性，所以操作用的接种环应避免用旧铁丝或电炉丝等制成．并在每次试验前先检查是否末挑茵的接种环接触试剂就有红色出现。
3．盐酸四甲基对苯二胺比盐酸二甲基对苯二胺敏感，将一滴盐酸叫甲基对苯二胺溶液滴在菌落上，如菌落很快变为深紫色并保留半分钟以上则为阳性。所以，在测定杜克雷菌等氧化酶试验弱阳性的菌株时，最好用前者。
4．如需保留菌种，在菌落末完全变黑时可挑少许转种。菌落一旦变黑，多数菌即告死亡。
【临床意义】
氧化酶试验试剂易得、操作简便，是淋球菌重要的初步诊断试验之一。标本涂片菌体形态符合淋菌特征，培养长出淋菌菌落，加上氧化酶试验阳性，即可做出初步诊断，开始治疗。如某些性状不符，则应进一步作确诊试验。

确证鉴定试验
糖发酵试验
【原理】  
淋球菌有分解葡萄糖的酶类，当它分解葡萄糖时产酸，使培养基的pH值降
低，因而培养基中的指示剂颜色改变，如酚红由红变黄，溴甲酚紫由紫变黄。
【方法】
世界卫生组织推荐的快速非生长的糖发酵微量法操作如下：
1．用无选择性的巧克力或哥伦比亚琼脂平皿(含5%马血或羊血)转种受检菌株，以获得纯菌。挑取培养18h~24h的纯菌2满环(直径3mm)混悬于0.3ml~0.4ml缓冲平衡盐指示溶液(BSS)中，制成浓浊菌悬液。每升BSS中含磷酸氢二钾0.4g，磷酸二氢钾0.1g，氯化钾8g，酚红0.6g，pH值为7.1~7.2。过滤灭菌后储存于4℃冰箱备用。
2．用5支70mm×10mm小试管，在1管~4管中分别加入20%经过滤灭菌的葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖溶液各0.05ml。第5管不加糖(对照管)。
3．每管加0.1mlBSS。
4．每管加0.05ml菌悬液，充分混匀。在37℃水浴箱中孵育4h，观察结果。
【结果】
淋球菌发酵葡萄糖，不发酵其他糖。因此，只有葡萄糖管的pH值下降，颜色由红变黄。其他糖管颜色不变。
几种奈瑟菌的糖发酵反应情况

【注意事项】
1． 用于糖发酵试验的糖纯度要高（尤其是麦芽糖中含葡萄糖必须<0.25%）。最好用进口的分析纯试剂。麦芽糖中混入了葡萄糖，可能产生使人误解的结果。
2． 用作试剂的菌要纯。如混有杂菌，会使结果杂乱无章。
3． 应该使用18h~24h的淋球菌培养物。如使用超过24h的培养物，可能产生假阴性结果。
4． 现已有一些满意的商品化糖发醇试验，如Minitek（BBL公司）。做时浸有高浓度糖的纸片放到一塑料凹槽中，加入浓厚菌悬液，孵箱中培养，多数反应发生在4h之内。个别菌株可培养过夜后读结果。
5． 缓冲液不合适或培养在二氧化碳孵箱中，会使所有糖管均变黄。
6． 使用胱氨酸胰酶琼脂（CTA）作糖发酵试验时，可用接种针将菌种入培养管的上1/3。如将琼脂量由1%增加到1.5%，糖含量由1%增加到2%，则糖发酵的时间可缩短到4h。如将糖发酵管放到37℃水浴中，则看结果的时间可缩短。
【临床意义】
糖发醇试验是淋球菌的鉴定试验之一。确证和区别其它奈瑟氏菌。

SPA协同凝集试验
【原理】
金黄色葡萄球菌的A蛋白具有吸附抗体IgG Fc段的特性。因此，挑选金黄色葡萄球菌的某些菌株(有市售)，与淋球菌特异性膜蛋白的小鼠单克隆抗体作用(致敏)，然后用其来检查待检株，如是淋球菌，则淋球菌菌体抗原和吸附于金黄色葡球菌上的抗淋菌单克隆抗体起作用，单抗又结合着金黄色葡萄球菌，从而产生凝集反应，如待检菌不是淋球菌，则不产生凝集反应，试验为阴性。
【材料】
以GonococcalOMNIReagent试剂盒为例，材料包括：
1． 协同凝集试剂1瓶。为抗淋球菌抗原的小鼠单克隆抗体(1A和1B)，已结合在灭活的金黄色葡萄球菌上。
2． 阴性对照试剂1瓶。为未免疫家兔的血清，也已结合于灭活的金黄色葡萄球菌上,作阴性对照用。试剂的有效期写在标签上。
【方法】
1．将已经初步诊断为淋球菌的菌落，接种于培养基中，于35℃~7℃(含5%~7% 二氧化碳的潮湿环境中)培养16h~24h。
2．将生长的菌落在0.5ml等渗盐水中制成1×108菌体/ml的菌悬液。在沸水中水浴5min。为防蒸发水浴时应加盖。
3．在试验纸片上加试剂和阴性对照液各1滴。
4．在二种试剂上各加1滴经水浴的菌悬液。菌悬液在加之前需充分混匀。
5．用一次性环充分混和菌悬液和试剂。每种试剂各用一新环。
6．倾斜摇动纸片，在1min内判定结果。
【结果】
所检菌与试剂起凝集反应者为阳性，和本试剂无反应者为阴性。
判定结果之标准为：
（4+）：凝集成大块，液体透明；
(3+)：凝集成大小不等之团块，液体透明；
(2+)：凝集成小团块或小颗粒，液体透明；
(+)： 凝集成散在细小的颗粒，速度慢，液体不透明；
(－)： 无明显凝集，液体混浊。
以2+以上为试验阳性。
【注意事项】
1．本试验的敏感性有限。因此，一般用作可疑菌的鉴定，作进一步确诊用。如直接用来检查标本(诊断)，常可因标本中菌量少、杂菌多(尤其是女性标本)而呈阴性。即使本试验阳性，临床医生也不应仅根据单一的试验来作出诊断，而应综合临床和实验室资料后谨慎作出。
2．本试验的特异性实际上取决于吸附于金黄色葡萄球菌上的淋球菌单克隆抗体的特异性。特异性强的单抗，可用来区别淋球菌和脑膜炎球菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、粘液奈瑟菌和粘膜炎布兰汉球菌。这些菌都可在无症状者的鼻咽腔粘膜上发现，偶尔可在生殖道粘膜上发现。
3．制备菌悬液时，盐水的酸碱度颇为重要，通常要求pH值在7.0~7.5之间。pH值过低会出现非特异性凝集反应。
4．为使结果易于观察，可将试剂(金黄色葡萄球菌)染成蓝色。
5．实验是稳定的，但观察结果应在1min内判定。试验物干时结果会受干扰。
6．为对试验进行质量控制，每次试验应设阳性对照和阴性对照。阳性对照液是一瓶特异的淋球菌纯培养提纯物。如果待检菌不是淋球菌而是其他奈瑟菌，则试剂和它无反应。阴性结果强烈提示试验不是淋球菌。
【临床意义】
本试验主要用作淋球菌的鉴定以进一步确诊。另外由于目前已制成抗淋球菌蛋白工、Ⅱ和Ⅲ型的单抗，用它制成不同血清型的协同凝集试剂，因此，本试验也可用于淋球菌的初步血清学分型。

淋病奈瑟球菌抗原检测实验
【检测原理】

淋病奈瑟球菌抗原检测试剂盒（乳胶免疫层析法）采用抗原抗体反应及免疫层析技术来定性检测临床标本中是否含有淋球菌抗原。
测试时，将处理过的标本滴入检测卡加样孔内,标本液体与乳胶结合垫中预先包被的用红色乳胶颗粒标记的淋球菌特异性抗体及蓝（绿）色乳胶标记的亲和素混合。然后，混合物随之在毛细效应下向另一端层析。
如果是阳性标本，红色乳胶标记的淋球菌抗体先与标本中的淋球菌抗原结合形成红色乳胶*抗体-抗原复合物，在层析过程中经过测试区时，复合物会被固定在测试区的另一个淋球菌抗体所捕获，形成红色乳胶*抗体-抗原-抗体（固定于膜上）的夹心复合物，在测试区（T）内会出现一条红色条带。
如果是阴性标本，由于不含淋球菌抗原，则测试区（T）内不能形成上述夹心复合物，将没有红色条带出现。膜上的质控区（C）内固定有生物素-BSA联结物，将捕获混合物中层析过来的蓝（绿）色乳胶颗粒标记的亲和素，在质控区（C）形成蓝（绿）色乳胶*亲和素-生物素-BSA（固定于膜上）的复合物。
因此，无论淋球菌抗原是否存在于临床标本中，一条蓝（绿）色条带都会出现在质控区（C）内。质控区（C）内所显现的蓝（绿）色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

【检验方法】
1、使用前请将试剂盒、标本置室温下复温至少半小时，使其恢复到室温(15℃-30℃)。
2、根据以下方法处理标本：
向标本处理管中竖直滴入标本处理液A 8滴，立即放入已取样拭子，挤压标本处理管，并转动拭子15次，然后将拭子在标本处理管中静置2分钟。
向标本处理管中竖直滴入标本处理液B 8滴，挤压标本处理管，并转动拭子15次，静置1分钟后，沿管壁挤压拭子后取出拭子弃之。盖上标本处理管的滴头。
3、从铝箔袋中取出检测卡，编写标本号，置水平桌面。
4、向检测卡加样孔中滴入3滴处理过的标本液。
5、在15分钟至30分钟内判读结果。

【检验结果的解释】
阳性（+）：两条条带出现。一条红色条带位于测试区（T）内，另一条蓝（绿）色条带位于质控区（C）。阳性结果表明：标本中含有淋球菌抗原。
阴性（-）：仅质控区（C）出现一条蓝（绿）色条带。在测试区（T）内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中不含淋球菌抗原,或是含量低于可检测范围。
无效：质控区（C）未出现蓝（绿）色条带，表明操作过程不正确或检测卡已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。
本试条检测结果仅供临床参考，不得作为临床诊治的唯一依据，需结合患者病情、临床表现、其他实验室检查等综合判断；阳性结果建议采用培养法进行确认，受试条分析灵敏度所限，阴性结果可能系样本中靶抗原浓度过低所致，建议对有疑问的阴性结果采用其他方法复核。
【检验方法的局限性】
1、该检测试剂仅证明标本中存在淋球菌抗原，不能区分淋球菌的死活。已接受治疗者，短期内体内仍可残留淋球菌抗原。
2、检测结果为阴性而临床症状仍存在，应做进一步临床检测。阴性结果仍不能完全排除淋球菌感染。
3、检测结果仅为临床诊断的参考依据。
 
【注意事项】
1、该检测试剂仅用于体外诊断，检测卡为一次性使用。
2、正常加样量为3滴，加样量过多或过少均可能会对试验结果产生不利影响。
3、因本产品为目视读取结果，为保证判读结果的正确，请勿在光线昏暗处对结果进行判读。
4、标本粘稠度太大（尤其某些宫颈标本），可使加样垫堵塞，标本下渗困难，层析过程不完全，出现无效结果。
5、建议用户尽可能使用塑料杆或钢杆，涤纶、人造丝或聚酯头的取样拭子。木杆及脱脂棉头的取样拭子容易对检测结果产生不利影响。
6、只能使用包装盒内提供的标本处理液，且不同批号标本处理液不能混用。
7、使用后的检测试剂和标本等废弃物应作为传染性物品按国家相关规定处理。不可在检测区域吸烟、进食、喝饮料、美容和处理隐形眼镜，应按照生物安全的相关要求来消毒和处理所有样本、试剂和潜在的污染物。
8、临用前打开检测卡包装袋。打开包装袋过久的检测卡可能受潮而影响测试结果。

淋球菌乳胶免疫层析试剂与其他试剂/方法的优缺点对比：

淋球菌对药物的敏感性测定方法
检测淋球菌对抗生素的敏感性，可用来检测是否产生了耐药株及其比率，为修订淋病治疗方案和制订对策提供重要流行病学资料。
K-B法抗生素药敏试验
【原理】
将含药纸片贴到涂有淋球菌的培养基上，药物即扩散到琼脂中。如果淋球菌对此药敏感则生长被抑制，在纸片周围形成一个透明的抑菌圈。琼脂中药物浓度与纸片距离成反比，距纸片越远药物浓度越小。因而，可根据抑菌圈的大小判定细菌对该药的敏感程度。    
【方法】
1． 用无选择性培养基(如巧克力培养基)再次分离淋球菌。挑取符合标准的淋菌菌落转种，置36℃烛缸培养18h～24h，以得到纯菌。
2． 刮取菌苔洗于M-H肉汤中，振荡，获得均匀的菌液。用McFarland比浊管比浊成1×109/ml浓度。
3． 用灭菌棉拭蘸取菌液均匀涂布于培养基表面，待干。为使菌液干得较快，可先将培养基平皿在试验前于37℃孵箱中半开盖烤20min~30min，除去表面水分。
4． 用无菌镊子将各种药物纸片紧贴于培养基表面。要求每张纸片中心问的距离不少于24mm。每个90mm的平皿可均匀贴7张纸片。然后放烛缸于350C孵箱或潮湿的含5%～10%CO2孵箱培养。
5． 培养16h～18h(也可24h)观看结果。
检查平皿并测量抑菌完全的抑菌圈直径。参照标准报告结果。
【结果】

【注意事项】
1． 目前用于治疗淋病的药物可分为7大类，每类药中只要选一种为代表试验，其敏感程度即可代表其他同类药的敏感性。（1）青霉素类，包括青霉素C、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素，其代表抗生素是青霉素G；（2）四环素类，包括盐酸四环素、强力霉素和二甲胺四环素，代表性抗生素是盐酸四环素；（3）壮观霉素类；（4）第二、三代头孢菌素，包括头孢甲氧噻吩、头孢呋肟和头孢曲松，可任选一种作敏感性试验；（5）氯霉素类，包括氯霉素和甲砜霉素可任选一种作代表；（6）氨基甙类抗生素主要是卡那霉素；（7）喹诺酮类药包括氟哌酸、氟嗪酸、和环丙氟哌酸，代表性药物是氟哌酸。

2． 虽然M-H琼脂用于敏感性试验一般来说是可靠的，但偶尔在某些批号间有显著差异。如果一种批号的培养基不能适合待试菌的生长，扩散试验中所得抑菌圈直径通常变大，可能超出质控范围，而且可以产生错误的结果。
3． 应使用培养18h～24h的菌落制成悬液并立即将悬液调至1×108/ml的浓度。为比浊准确起见，应将试管对着白底黑线卡。有些试验装置可使接种物直接标准化而不需调整。

4． 在将菌株悬液浓度调整后的15min内，用棉拭蘸菌液在经过烘干的GC培养基整个表面密集涂布。每次将平皿旋转60°，以确保接种物均匀分布。如培养皿涂布满意且接种物正确，则抑菌圈为一致的圈形，菌在平皿中为融合生长。如为孤立的菌落生长，说明接种物过少。接种后盖上平皿盖放置3min～5min，使多余的水分被吸干，然后再贴药敏纸片。避免接种物过浓，不能用未经稀释的培养过夜和肉汤培养物接种平皿。所用肉汤的pH值应在7.2～7.4。

5． 将适宜的药物纸片放于接种菌液的琼脂平皿上，用镊子或针尖将每个纸片轻轻压在琼脂表面以确保完全贴紧。由于某些药物的扩散极快，纸片一旦贴到平皿上就不要再移动。

6． 培养16h～18h后，检查平皿并测量抑菌完全的抑菌圈直径（也包括纸片的直径）。测量最小达毫米水平，用游标卡、普通尺或特殊的模板来读取结果。在抑菌圈边缘，肉眼勉强可见不明显的细小菌落生长的地方即为判定终点。在明显的抑菌圈内有大菌落生长时应对它传代培养，重新鉴定，并重新试验。抑菌圈通常抡廓清楚，朦胧的微弱生长可忽略不计。

7．用于敏感性试验的含药纸片，一般需分开装瓶，包装中须确保防潮。为了长期保需：
（1） 据药物的性质需冷藏（8℃或以下）或－14℃以下冰冻保存。
（2） 为了保持纸片的药效，β-内酰胺族的含药纸片需要冻存，少量因工作需要的可在冷藏条件下保存到—周。
（3） 试验前将冷藏箱或冰柜中未开封的纸片容器取出，放置1~2h使它们与室温平衡，然后再打开容器，这样可减少热空气与冷的纸片容器发生冷凝现象。
（4） 当使用—种特殊的纸片分配器时，必须将其盖紧，并附有指示性干燥剂。在打开前须使其与室温平衡。当干燥指示剂变色时应及时更换以免过潮。
（5） 在不使用的情况下，应将装有纸片的分配配冷藏。
（6） 纸片应在有效期内使用，已到失效期的纸片应扔掉。

【临床意义】 
纸片扩散法是检测淋球菌对抗生素敏感性的最常用的方法。但纸片法受多种因素影响，结果常不够稳定，不少学者认为，本试验的目的主要是用以指导治疗。“敏感”提示用所试药物以标准剂量进行治疗时失败的可能性＜5%；“耐药”提示临床治疗的失败率＞15%；“中等”结果提示病人用标准剂量的被试抗生素治疗，预期失败率为5%～15%，固而在大部分中度敏感的病人，用较高剂量或延长疗程则治愈率仍可＞95%。若对本地区菌株进行系统耐药监测，则应用琼脂稀释法测定每年菌株的MIC。

琼脂稀释法（MIC）
【原理】
将待检菌株种于含有不同抗菌药物的琼脂平皿上，药物浓度h细菌生长，药物浓度高时细菌生长被抑制，据此可测出药物对该菌的最小抑菌浓度，依标准判定菌是否为耐药菌株。
【方法】
1． 精确称取纯品抗生素，溶于合适的溶剂中，用蒸馏水稀释后加到培养基中，使培养基中药物的浓度由少到多逐倍递增。
2． 对待检菌作初步鉴定之后挑取符合标准的菌落作纯培养，于36℃二氧化碳烛缸中培养24h。
3． 用接种环刮下菌苔，用M-H肉汤制成1×107/ml的悬液。
4． 用多头接种器或特制接种环挑取菌液（约1l～2l）接种到含不同浓度药物的琼脂平皿上。同常规法培养，次日判定结果。
【结果】
淋球菌对药物的敏感度是指淋球菌不生长的药物最高稀释度。常用g/ml或mg/L表示。此数值也即该药对此菌的最小抑菌浓度（MIC）。世界卫生组织要求监测的药物的敏感度（青霉素、四环素、壮观霉素、头孢三嗪、环丙氟哌酸）。
【注意事项】
1．抗生素应为纯品，应川精密天平称量。
2．在制备抗生素贮存液时所用的溶剂随抗生素种类而异。
3．根据当地耐药水平的浓度范围，选择制备平板中抗生素的含量。
4．含易分解的抗生素(如青霉素)的培养基建议在3天内用完，其他的可用一周。
5．应用世界卫生组织A、B、C、D、E五株参考菌株作质控。
【临床意义】
琼脂稀释法是目前测定淋球菌对药物的敏感度的最为准确的方法，重复性好,结果较为可靠。所获资料可作为对当地流行菌株耐药测定的依据。但MIC在耐药范围的菌株，其产生机理可不同。如对青霉素在耐药范围的淋球菌菌株不一定全是PPNG菌株。PPNG菌株是由质粒介导的产青霉素酶的淋球菌。此外，还有由染色体突变而产生的耐青霉素菌株，它不产生青霉素酶。

产青霉素酶淋球菌菌株(PPNG)测定                  
青霉素琼脂法
【原理】
    某些淋球菌菌株获得耐药质粒后产生β-内酰胺酶。该酶能分解青霉素，使培养基的pH值降低，培养基颜色发生改变。
【材料】 
     配制培养基(用3 000ml烧瓶配制)：琼脂30g加蒸馏水2000ml，用1mol/L NaOH溶液调 pH值至10.8，加入0.5%酚红溶液20ml，充分混合后煮沸。检查琼脂是否充分溶解，冷却到50℃，pH值8.5，以无菌手续加人青霉素(600mg)10支(每支先用4ml蒸馏水溶解)充分混匀后倒平皿，每65mm的平皿倒入13ml。
【方法】
1．将待测菌株培养过夜。
2．用接种环刮取菌苔涂于青霉素琼脂上，约绿豆大小。
3．盖盖后于37℃孵箱培养30min，观察结果。
【结果】
产酶菌株分解青霉素产生青霉噻唑酸使培养基pH值降低，颜色由红变黄。
【临床意义】
用于检测淋球菌是否为产β-内酰胺酶菌株。

碘量法（β-内酰胺酶测定）
【原理】
    β-内酰胺酶能裂解青霉素的β-内酰胺环形成青霉噻唑酸，它与淀粉竞争游离碘, 破坏了碘和淀粉的蓝色复合物，使蓝色变为无色。
【方法】
1．将0.25g青霉素溶于41.7ml pH值6.0的磷酸盐缓冲液中，使其浓度成6000μg/ml。取0.1ml于一小试管中。
2．将培养18h～24h的菌在含青霉素试管内制成浓厚菌悬液(109/ml)。
3．在37℃水浴中放置30min，不时摇动，使酶能破坏青霉素。
4．加入1%可溶性淀粉溶液0.05ml，摇动。
5．加入碘液0.02ml。
6．在37℃水浴中放置10min。观察结果。
【结果】
在10min内能使蓝色完全消退的菌株为β-内酰胺酶阳性，不消褪者为阴性。
【注意事项】
1．由于青霉素溶液很易分解，因而用于试验的青霉素溶液应新鲜配制。如试验的工作量大，青霉素溶液配成后可分装于试管中，在低温冰箱(－25℃)冻存起来。但即使这样，保存时间也不宜太长。
2．淀粉液最好新鲜配制。在100ml,蒸馏水中加入1g可溶性淀粉，放到开水中水浴直到淀粉溶解。贮于冰箱不要超过1周。
3．碘液如产生沉淀应新配制。
4．试验应按步骤操作，如果碘加得过早，酶反应就会停止，产生假阴性结果。
7． 每次试验最好用已知的阳性菌株和阴性菌株作对照